ACOT12 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-410299-ACT

O ACOT12 humano codifica uma tioesterase de acil-CoA que hidrolisa tioésteres de acil-CoA em ácidos graxos livres e coenzima A, ajudando a manter os estoques intracelulares de CoA e a regular o fluxo metabólico derivado de lipídios. Ao modular o equilíbrio entre ácidos graxos ativados e livres, o ACOT12 influencia vias relacionadas à oxidação de ácidos graxos, ao remodelamento de lipídios e à homeostase energética de forma mais ampla. Alterações na expressão de ACOT12 têm sido associadas à reprogramação metabólica e à desregulação lipídica hepática, tornando-o relevante para estudos de esteatose, estresse metabólico ligado à inflamação e metabolismo associado a tumores. Sua atividade oferece um ponto de entrada mecanístico para dissecar como a disponibilidade de acil-CoA molda a utilização de lipídios nas mitocôndrias e no citosol.

ACOT12 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ACOT12 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ACOT12 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ACOT12 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ACOT12, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ACOT12. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ACOT12 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ACOT12 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ACOT12 em células tumorais com expressão de ACOT12 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.