ACLP/AEBP1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403540

Panoramica

AEBP1 codifica la adipocyte enhancer-binding protein 1, nota anche come ACLP, una proteina associata alla matrice extracellulare implicata nell’organizzazione del collagene, nell’adesione cellula–matrice e nel rimodellamento tissutale. In contesti stromali e simil-fibroblastici, AEBP1 è collegata a vie che regolano l’attivazione mesenchimale, la segnalazione infiammatoria e il turnover della matrice extracellulare, influenzando la migrazione cellulare e le proprietà meccaniche dei tessuti. Un’espressione alterata di AEBP1/ACLP è stata associata a rimodellamento fibrotico e alla biologia del microambiente tumorale, dove può correlare con cambiamenti nella composizione dello stroma e nella segnalazione legata al sistema immunitario. Queste caratteristiche rendono AEBP1 un bersaglio utile per studi meccanicistici su fenotipi guidati dalla matrice e transizioni dello stato cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ACLP/AEBP1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene AEBP1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del AEBP1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto AEBP1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ACLP/AEBP1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di AEBP1 per lo studio della segnalazione di ACLP/AEBP1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni AEBP1 critici per la funzione di ACLP/AEBP1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di AEBP1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ACLP/AEBP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal ACLP/AEBP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus AEBP1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ACLP/AEBP1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR ACLP/AEBP1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia AEBP1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio AEBP1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.