ACLP/AEBP1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403540-ACT

AEBP1は、脂肪細胞エンハンサー結合タンパク質1（adipocyte enhancer-binding protein 1）をコードしており、ACLPとしても知られる細胞外マトリックス（ECM）関連タンパク質です。コラーゲンの組織化、間葉系細胞の分化、ならびに組織リモデリングの制御に関与するとされています。ヒト細胞では、AEBP1の活性は線維芽細胞の活性化プログラムと関連し、ECM沈着や硬さの感知を協調させるTGF-β/SMADシグナル伝達やインテグリン依存的接着経路とのクロストークにも結び付いています。AEBP1発現の破綻は、炎症性微小環境や腫瘍関連ストローマに広く見られる線維化様表現型やストローマのリモデリングと関連づけられています。これらの特性により、AEBP1はマトリックス生物学、細胞—マトリックス間シグナル伝達、そして結合組織の恒常性を規定する転写プログラムを研究するための有用な分子指標となります。

ACLP/AEBP1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性AEBP1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ACLP/AEBP1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における AEBP1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はAEBP1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ACLP/AEBP1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のAEBP1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるACLP/AEBP1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびAEBP1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるACLP/AEBP1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。