ACE Plasmide Double Nickase (h): sc-400759-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ACE Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ACE Double Nickase Plasmid (h) e il ACE Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ACE. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ACE Antibody (2E2): sc-23908
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ACE Plasmide Double Nickase (h) | sc-400759-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ACE Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400759-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
L’enzima di conversione dell’angiotensina (ACE) è una dipeptidil carbossipeptidasi zinco-dipendente ancorata alla superficie cellulare che converte l’angiotensina I nel vasocostrittore angiotensina II e inattiva la bradichinina. Attraverso queste reazioni, ACE è un regolatore centrale del sistema renina–angiotensina, influenzando il tono vascolare, l’equilibrio elettrolitico, la segnalazione infiammatoria e il rimodellamento tissutale. L’attività di ACE modella le vie di segnalazione a valle mediate dai recettori dell’angiotensina II, incluse le risposte associate a MAPK e NF-κB, con effetti dipendenti dal contesto sulla funzione endoteliale e sui processi legati alla fibrosi. Un’alterata espressione di ACE o variazioni genetiche sono state associate a fenotipi cardiometabolici e renali e vengono frequentemente investigate in modelli di ipertensione, rimodellamento cardiovascolare e biologia delle malattie renali.
ACE Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ACE nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ACE. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ACE. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ACE interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.