ACCβ Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401903-ACT

ACACB codifica a acetil-CoA carboxilase beta (ACCβ), uma enzima dependente de biotina associada à mitocôndria que catalisa a formação de malonil-CoA, um regulador-chave da oxidação de ácidos graxos de cadeia longa. Ao modular os níveis de malonil-CoA, a ACCβ controla a atividade da CPT1 e influencia o equilíbrio entre a síntese de ácidos graxos e a β-oxidação, conectando o metabolismo lipídico à homeostase energética celular. A atividade da ACACB integra-se a vias de detecção de nutrientes, incluindo a sinalização por AMPK, e responde ao estado metabólico no fígado, músculo e outros tecidos oxidativos. A desregulação do fluxo lipídico associado à ACCβ tem sido relacionada a fenótipos metabólicos relevantes para resistência à insulina, dislipidemia e esteatose hepática, dando suporte a estudos mecanísticos na biologia de doenças metabólicas.

ACCβ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ACACB sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ACCβ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ACACB em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ACACB, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ACCβ. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ACACB nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ACCβ no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ACCβ em células tumorais com expressão de ACACB silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.