ABP1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-410674-LAC

AOC1 codifica l’ammina ossidasi 1 contenente rame (ABP1/DAO), un enzima secreto e associato alla membrana che catalizza la deaminazione ossidativa delle ammine primarie, incluse istamina e poliammine, generando aldeidi, ammoniaca e perossido di idrogeno. Attraverso la regolazione del turnover delle ammine biogene e della produzione di specie reattive dell’ossigeno, AOC1 influenza la segnalazione infiammatoria, la funzione della barriera epiteliale e l’omeostasi redox cellulare. L’attività di ABP1 si interseca con vie legate all’immunità mucosale, alla biologia vascolare e al rimodellamento della matrice extracellulare, e un’espressione alterata è stata riportata in contesti che coinvolgono infiammazione, allergia e fenotipi del microambiente tumorale. Queste caratteristiche rendono AOC1 un bersaglio rilevante per studi meccanicistici sul metabolismo dell’istamina, sulle risposte allo stress ossidativo e sulla comunicazione cellula–cellula in sistemi modello umani.

Le particelle di attivazione lentivirale ABP1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di AOC1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale ABP1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione AOC1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di ABP1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo AOC1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.