ABCG5 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402729-ACT

ABCG5はATP結合カセット（ABC）トランスポーターをコードし、ABCG8とヘテロ二量体を形成することで、小腸上皮細胞の管腔側（頂端側）膜および肝細胞の胆小管膜を介したステロール排出（エフラックス）を担います。このトランスポーター複合体は、食事由来ステロールの腸管吸収を抑制するとともに、コレステロールおよび植物ステロールの胆汁中分泌を促進し、全身の脂質恒常性の維持に寄与します。ABCG5の活性は、LXRにより制御される転写プログラムや胆汁酸代謝を含む、肝臓・腸管におけるステロール取扱い経路と統合的に連携しています。ABCG5の遺伝学的機能障害や発現低下は、シトステロール血症などのステロール蓄積表現型と関連し、脂質異常症に関する研究モデルにも影響し得ます。

ABCG5 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ABCG5の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ABCG5 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ABCG5 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はABCG5転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ABCG5の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のABCG5遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるABCG5依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびABCG5発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるABCG5経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。