Plasmide Double Nickase (h) ABCG2: sc-416737-NIC

ABCG2 (également appelé BCRP) code un transporteur d'efflux de la famille des transporteurs ABC (ATP-binding cassette) qui limite l'accumulation intracellulaire de divers xénobiotiques et métabolites endogènes. Localisé à la membrane plasmique dans des populations cellulaires de barrière et de type souche, ABCG2 contribue au transport épithélial, à la détoxification cellulaire et à la protection contre le stress oxydatif et chimique grâce à l'export ATP-dépendant de ses substrats. Son activité interfère avec la prise en charge pharmacocinétique et les programmes de réponse au stress en modulant l'exposition intracellulaire aux petites molécules et aux métabolites liés aux porphyrines. Une expression ou une fonction dysrégulée d'ABCG2 est fréquemment étudiée dans le contexte des phénotypes de résistance multiple aux médicaments, de la biologie des barrières tissulaires et de l'hétérogénéité tumorale, ainsi que des variants héréditaires affectant l'activité du transporteur.

ABCG2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ABCG2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ABCG2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ABCG2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ABCG2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.