Plasmide CRISPR d'Activation (h) ABCG2: sc-416737-ACT

ABCG2 (membre 2 de la sous-famille G des transporteurs à cassette de liaison à l’ATP, ATP-binding cassette) est un transporteur d’efflux de la membrane plasmique qui utilise l’hydrolyse de l’ATP pour expulser une large gamme de métabolites endogènes et de xénobiotiques. Il est fortement exprimé dans les tissus barrières et dans des compartiments cellulaires de type cellules souches, où il contribue au phénotype de « side population » et régule l’accumulation intracellulaire de petites molécules. L’activité d’ABCG2 s’articule avec des processus de détoxification et liés au stress oxydatif, influençant l’homéostasie cellulaire face à des contraintes métaboliques et environnementales. Une expression ou une fonction altérée d’ABCG2 est associée à une variabilité de la disposition des médicaments et a été étudiée en biologie du cancer et dans des contextes de protection tissulaire, où l’efflux médié par des transporteurs façonne la sensibilité cellulaire aux agents chimiques stressants.

ABCG2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ABCG2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ABCG2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ABCG2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ABCG2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ABCG2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ABCG2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ABCG2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ABCG2 dans les cellules tumorales présentant une expression de ABCG2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.