5-LO Plasmídeo duplo de Nickase (m): sc-419091-NIC
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- 5-LOO plasmídeo de dupla Nickase (m) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase 5-LO (m) e o Plasmídeo Double Nickase 5-LO (m2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para Alox5. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:5-LO Anticorpo (33): sc-136195
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
5-LO Plasmídeo duplo de Nickase (m) | sc-419091-NIC | 20 µg | $410.00 |
O gene Alox5 de camundongo codifica a 5-lipoxigenase (5-LO), uma dioxigenase de ferro não heme que catalisa as primeiras etapas comprometidas da biossíntese de leucotrienos a partir do ácido araquidônico. Em conjunto com a FLAP (ALOX5AP), a 5-LO gera LTA4, que é posteriormente convertido em LTB4 e em leucotrienos cisteinílicos — mediadores lipídicos centrais que modulam o recrutamento de leucócitos, a permeabilidade vascular e a sinalização da imunidade inata. A atividade da ALOX5 é regulada pela translocação para a membrana dependente de cálcio e por fosforilação, integrando vias acionadas por receptores que modulam programas gênicos inflamatórios. A desregulação da sinalização 5-LO/leucotrienos tem sido associada a modelos de inflamação das vias aéreas do tipo asma, aterosclerose, neuroinflamação e fenótipos mieloides associados a tumores, tornando o Alox5 um nó útil para o estudo de redes de eicosanoides.
5-LO O Plasmídeo de Nickase Dupla (m) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Alox5 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Alox5. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Alox5. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Alox5 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.