2B28 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-432576

Visão geral

Ubxn1 (também referido como 2B28) codifica uma proteína adaptadora contendo um domínio UBX que conecta processos dependentes de ubiquitina à ATPase AAA+ p97/VCP, coordenando a extração e a degradação de substratos. Por meio desse acoplamento, a UBXN1 contribui para o controle da proteostase, incluindo a degradação associada ao retículo endoplasmático (ERAD), a regulação do controle de qualidade de proteínas e a modulação de vias de sinalização responsivas ao estresse. A UBXN1 tem sido implicada em vias que influenciam a progressão do ciclo celular e o manejo de proteínas mal dobradas ou propensas à agregação, ligando-a a mecanismos relevantes para a neurodegeneração e a biologia do câncer. Em sistemas murinos, a perturbação de Ubxn1 oferece uma abordagem prática para investigar redes centradas em p97/VCP e a remodelação, mediada por ubiquitina, de complexos proteicos.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO 2B28 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Ubxn1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Ubxn1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Ubxn1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína 2B28.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Ubxn1 para a investigação da sinalização de 2B28, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Ubxn1 críticos para a função 2B28
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Ubxn1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo 2B28 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo 2B28 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Ubxn1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo 2B28 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR 2B28 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Ubxn1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Ubxn1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.