γ-GCSc Plasmide Double Nickase (h): sc-401133-NIC

GCLC codifica la subunità catalitica della glutammato–cisteina ligasi (γ-GCSc), l’enzima limitante la velocità nella biosintesi del glutatione che catalizza la formazione di γ-glutammilcisteina. Controllando i pool cellulari di glutatione, γ-GCSc sostiene l’omeostasi redox, la detossificazione degli elettrofili e il mantenimento della capacità antiossidante mitocondriale e citosolica, con effetti a valle sulla segnalazione sensibile alle ROS e sull’adattamento metabolico. L’attività di GCLC è strettamente regolata nelle vie di risposta allo stress ossidativo, inclusi i programmi trascrizionali guidati da NRF2/KEAP1, e influenza la suscettibilità alla ferroptosi e ad altri meccanismi di morte cellulare indotti dallo stress. La disregolazione del metabolismo del glutatione dipendente da GCLC è stata associata a risposte alterate allo stress ossidativo e agli xenobiotici in contesti quali malattie epatiche, neurodegenerazione e biologia del cancro.

γ-GCSc Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GCLC nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GCLC. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GCLC. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GCLC interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.