Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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γ-GCSc Double Nickase Plasmid (h): sc-401133-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das γ-GCSc Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- γ-GCSc Double-Nickase-Plasmid (h) und γ-GCSc Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GCLC abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: γ-GCSc: sc-390811
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
γ-GCSc Double Nickase Plasmid (h) | sc-401133-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
γ-GCSc Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401133-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GCLC kodiert die katalytische Untereinheit der Glutamat–Cystein-Ligase (γ-GCSc), des geschwindigkeitsbestimmenden Enzyms der Glutathionbiosynthese, das die Bildung von γ-Glutamylcystein katalysiert. Durch die Steuerung zellulärer Glutathionpools unterstützt γ-GCSc die Redoxhomöostase, die Entgiftung elektrophiler Verbindungen sowie die Aufrechterhaltung der antioxidativen Kapazität in Mitochondrien und Zytosol – mit nachgeschalteten Effekten auf ROS-sensitive Signalwege und metabolische Anpassungen. Die GCLC-Aktivität ist in Signalwegen der oxidativen Stressantwort eng reguliert, einschließlich NRF2/KEAP1-gesteuerter Transkriptionsprogramme, und beeinflusst die Anfälligkeit für Ferroptose und andere stressinduzierte Zelltodmechanismen. Eine Fehlregulation des GCLC-abhängigen Glutathionstoffwechsels wurde mit veränderten Reaktionen auf oxidativen Stress und Xenobiotika in Kontexten wie Lebererkrankungen, Neurodegeneration und Krebsbiologie in Verbindung gebracht.
γ-GCSc Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GCLC-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GCLC abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GCLC-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GCLC-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.