γE-crystallin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419832

Übersicht

Cryge kodiert γE‑Crystallin, ein strukturelles Protein der Linsenfaserzellen innerhalb der β/γ‑Crystallin‑Superfamilie, das zum außergewöhnlich hohen Brechungsindex und zur langfristigen Transparenz der Augenlinse beiträgt. γE‑Crystallin ist am streng regulierten Prozess der Differenzierung und Reifung von Linsenfaserzellen beteiligt, bei dem die Packung der Crystalline, die Proteinstabilität und die Resistenz gegenüber Aggregation für die Proteostase zentral sind. Eine Störung der Crystallin‑Homöostase kann lichtstreuende Aggregate fördern und die Biomechanik der Linse beeinträchtigen, wodurch Veränderungen in Crystallin‑Genen mit kataraktassoziierten Phänotypen und damit verbundenen Mechanismen der Linsentrübung verknüpft sind. In Mausmodellen wird Cryge untersucht, um die Organisation des Crystallin‑Netzwerks, posttranslationale Modifikationen und Stressantworten zu verstehen, die die Linsenklarheit im Verlauf der Zeit beeinflussen.

Das γE-crystallin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Cryge-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Cryge-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Cryge nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die γE-crystallin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Cryge-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der γE-crystallin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Cryge-Exone abzielen, die für die γE-crystallin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Cryge-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom γE-crystallin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom γE-crystallin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Cryge-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das γE-crystallin HDR-Plasmid (m) und γE-crystallin HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Cryge-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Cryge-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.