γE-crystallin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419832

概要

Cryge はγE-クリスタリンをコードしており、γE-クリスタリンはβ/γ-クリスタリン・スーパーファミリーに属する、水晶体線維細胞の構造タンパク質です。これは眼の水晶体が非常に高い屈折率と長期的な透明性を維持するうえで重要な役割を担います。γE-クリスタリンは、水晶体線維細胞の分化と成熟という厳密に制御された過程に関与しており、その際にはクリスタリンの高密度なパッキング、タンパク質の安定性、凝集に対する抵抗性がプロテオスタシスの中核となります。クリスタリン恒常性が破綻すると光散乱性の凝集体形成が促進され、水晶体の生体力学的特性も損なわれ得るため、クリスタリン遺伝子の異常は白内障関連表現型やそれに伴う水晶体混濁の機序と結び付けられます。マウスモデルでは、Cryge はクリスタリン・ネットワークの組織化、翻訳後修飾、ならびに経時的な水晶体透明性に影響するストレス応答を理解するために研究されています。

γE-crystallin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるCryge遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Cryge内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Crygeのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、γE-crystallinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、γE-crystallinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Cryge欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• γE-crystallinの機能に不可欠なCrygeエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Crygeゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• γE-crystallin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびγE-crystallin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Cryge遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  γE-crystallin HDRプラスミド（m）および γE-crystallin HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCrygeホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCryge標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。