Plásmido CRISPR de Activación (h) β-TrCP: sc-400971-ACT

BTRC codifica la proteína humana con dominio F-box β‑TrCP, un componente de reconocimiento de sustratos del complejo ligasa E3 de ubiquitina SCF (SKP1–CUL1–F-box) que dirige la ubiquitinación dependiente de fosfodegrón y la degradación proteasomal de diversas proteínas reguladoras. Mediante esta actividad, β‑TrCP integra la señalización y la proteostasis en vías como NF‑κB (a través de la regulación de IκB), Wnt/β‑catenina, el control del ciclo celular y las respuestas al daño del ADN, modulando así programas transcripcionales y la integridad de los puntos de control. La alteración de la expresión de BTRC o de su direccionamiento de sustratos puede perturbar la señalización inflamatoria, la proliferación y la estabilidad genómica, procesos implicados con frecuencia en la biología del cáncer y en otros mecanismos de enfermedades complejas. Debido a que β‑TrCP abarca un amplio espectro de sustratos, se estudia habitualmente para cartografiar el reconfiguramiento de redes mediado por ubiquitina y la intercomunicación entre vías bajo estímulos definidos.

β-TrCP El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de BTRC sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

β-TrCP El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus BTRC en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional BTRC, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de β-TrCP. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo BTRC y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de β-TrCP en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía β-TrCP en células tumorales con expresión de BTRC silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.