βPAK CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422108

概要

Pak3はβPAK（p21活性化キナーゼ3）をコードしており、RhoファミリーGTPアーゼであるRAC1およびCDC42の下流で活性化されるセリン/スレオニンキナーゼです。βPAKは、MAPK/ERKシグナル伝達、細胞接着のダイナミクス、活動依存的な神経可塑性と交差する経路を介して、アクチン細胞骨格の再編成、神経突起の伸長、シナプスシグナル伝達を協調的に制御します。マウスでは、Pak3の機能は神経系の発生および神経回路機能の研究において特に重要であり、PAKシグナル伝達の変化は樹状突起スパインの形態やシナプス結合性に影響を及ぼし得ます。PAKファミリーのシグナル伝達の異常は神経発達および認知に関わる表現型と関連づけられており、神経細胞シグナル伝達と細胞骨格制御の機序研究に有用であることが示唆されています。

βPAK CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるPak3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Pak3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Pak3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、βPAKタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、βPAKシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Pak3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• βPAKの機能に不可欠なPak3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Pak3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• βPAK CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびβPAK CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Pak3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  βPAK HDRプラスミド（m）および βPAK HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPak3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPak3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。