β8 Tubulin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401438-ACT

TUBB8 はβ8チューブリンをコードしており、β8チューブリンは霊長類に特異的なβチューブリンのアイソタイプです。αチューブリンとヘテロ二量体を形成して微小管を構築し、細胞骨格の組織化、細胞内輸送、ならびに細胞分裂時の染色体分配を支えます。チューブリンのアイソタイプ組成によって調節される微小管ダイナミクスは、紡錘体の形成、細胞極性、そして有糸分裂および初期発生過程を協調させる輸送経路に影響します。ヒトでは、TUBB8 の変異が卵母細胞の減数分裂紡錘体の完全性や初期胚の発生能の異常と関連しており、生殖生物学および細胞骨格制御の研究において重要です。さらに、チューブリンネットワークの挙動変化は、細胞系におけるストレス応答、分裂エラー、微小管関連表現型をモデル化するうえでも広く有用な情報を提供します。

β8 Tubulin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TUBB8の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

β8 Tubulin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TUBB8 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTUBB8転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性β8 Tubulinの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTUBB8遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるβ8 Tubulin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTUBB8発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるβ8 Tubulin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。