β1-Syntrophin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405993-ACT

SNTB1 codifica a β1-sintrofina, um adaptador do citoesqueleto no complexo de proteínas associado à distrofina, que atua como plataforma para proteínas de sinalização na membrana plasmática. Por meio do seu domínio PDZ, a β1-sintrofina organiza microdomínios que acoplam receptores de membrana e canais iônicos a estruturas ricas em actina, moldando processos como adesão celular, mecanotransdução e transdução de sinais em tecidos excitáveis e não excitáveis. Complexos dependentes de SNTB1 influenciam vias ligadas à sinalização por óxido nítrico e à localização de canais, contribuindo para a estabilidade da membrana e para respostas celulares reguladas. A desregulação de componentes do complexo de distrofina e das redes de ancoragem associadas tem sido implicada em fenótipos neuromusculares e cardiomiopáticos, tornando o SNTB1 um alvo relevante para investigar a sinalização de membrana associada a doenças e a organização do citoesqueleto.

β1-Syntrophin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SNTB1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

β1-Syntrophin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SNTB1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SNTB1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de β1-Syntrophin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SNTB1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de β1-Syntrophin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via β1-Syntrophin em células tumorais com expressão de SNTB1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.