α_2A-AR Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401545-ACT

ADRA2A codifica o α2A-AR humano, um recetor adrenérgico acoplado a Gi/o que modula a excitabilidade celular e a secreção ao inibir a adenilil ciclase, reduzir a sinalização cAMP/PKA e regular a atividade de canais iónicos. A ativação do recetor também influencia as vias MAPK/ERK e vias associadas à β-arrestina, moldando a libertação de neurotransmissores e a transmissão sináptica nos sistemas nervosos central e periférico. Para além de funções na regulação neuroendócrina e autonómica, a sinalização de ADRA2A afeta processos metabólicos e vasculares através do controlo de circuitos responsivos às catecolaminas. A desregulação da sinalização de recetores adrenérgicos tem sido associada a fenótipos neuropsiquiátricos e a características cardiometabólicas, sustentando a sua utilização como alvo mecanístico em estudos de farmacologia de recetores e de transdução de sinal.

α2A-AR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ADRA2A sem alterar a sequência de ADN subjacente.

α2A-AR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ADRA2A em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ADRA2A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de α2A-AR. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ADRA2A nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de α2A-AR no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via α2A-AR em células tumorais com expressão de ADRA2A silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.