α-sarcoglycan CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403837-ACT

SGCA kodiert das menschliche α‑Sarkoglykan, eine zentrale Komponente des Sarkoglykan‑Subkomplexes innerhalb des dystrophinassoziierten Glykoproteinkomplexes, der das Sarkolemm während der Muskelkontraktion stabilisiert. Durch die Kopplung der extrazellulären Matrix an das Aktin‑Zytoskelett unterstützt α‑Sarkoglykan die Membranintegrität und Mechanotransduktionswege, die für die Widerstandsfähigkeit von Muskelfasern essenziell sind. Ein Verlust oder eine Funktionsstörung von SGCA beeinträchtigt die Stabilität des Sarkolemms, begünstigt kontraktionsbedingte Schäden und führt zu einer veränderten Muskelhomöostase. SGCA wird daher breit in der Skelett‑ und Herzmuskelbiologie, bei der Assemblierung von Membranproteinen sowie bei Myopathien im Zusammenhang mit dem Dystrophin‑Komplex untersucht.

α-sarcoglycan Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SGCA-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

α-sarcoglycan Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SGCA-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SGCA-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen α-sarcoglycan-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SGCA-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von α-sarcoglycan-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des α-sarcoglycan-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SGCA-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.