α-parvin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405769

Panoramica

PARVA codifica l’α-parvina, un adattatore delle adesioni focali legante l’actina che si associa alla integrin-linked kinase (ILK) e a PINCH per formare il complesso IPP, collegando le integrine al citoscheletro di actina. Attraverso interazioni con paxillina e altri componenti dell’adesione, l’α-parvina contribuisce all’assemblaggio delle adesioni focali, al rimodellamento del citoscheletro e alla meccanotrasduzione durante lo spreading e la migrazione cellulare. La segnalazione dipendente da PARVA si integra con le vie delle integrine/FAK e con la dinamica dell’actina regolata da piccole GTPasi, sostenendo la sopravvivenza dipendente dall’adesione e la polarità cellulare. La disregolazione di questi processi è rilevante negli studi sull’invasione delle cellule tumorali, sul rimodellamento tissutale associato alla fibrosi e nella biologia cardiovascolare e della muscolatura liscia, dove sono implicate alterazioni della segnalazione di adesione e contrattile.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO α-parvin (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PARVA in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PARVA insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PARVA a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina α-parvin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PARVA per lo studio della segnalazione di α-parvin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PARVA critici per la funzione di α-parvin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PARVA per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal α-parvin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal α-parvin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PARVA. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal α-parvin Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR α-parvin (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PARVA per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PARVA definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.