α N-catenin Double Nickase Plasmid (h): sc-405168-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das α N-catenin Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- α N-catenin Double-Nickase-Plasmid (h) und α N-catenin Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CTNNA2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
α N-catenin Double Nickase Plasmid (h) | sc-405168-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
α N-catenin Double Nickase Plasmid (h2) | sc-405168-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CTNNA2 kodiert das menschliche α‑N‑Catenin, ein aktinbindendes Adhärenzkontakt-Protein, das Cadherin–β‑Catenin‑Komplexe mit dem kortikalen Zytoskelett verbindet, um die Zell‑Zell‑Adhäsion zu stabilisieren und die Gewebearchitektur zu regulieren. Durch die Koordination der Mechanik an Zellkontakten beeinflusst α‑N‑Catenin das Zytoskelett-Remodeling, die neuronale Konnektivität und Signalausgänge, die mit Wnt/β‑Catenin‑assoziierten Adhäsionsdynamiken verknüpft sind. Die CTNNA2‑Aktivität ist eng mit Prozessen wie Zellmigration und Synapsenorganisation verbunden, bei denen eine veränderte Adhäsionsgerüstbildung die Netzwerkbildung und Zellpositionierung stören kann. Genetische und expressionsbezogene Veränderungen in CTNNA2 wurden mit neuroentwicklungsbezogenen und neuropsychiatrischen Phänotypen in Verbindung gebracht, was seinen Nutzen als Ziel für mechanistische Studien zur adhäsionsabhängigen Zellfunktion unterstreicht.
α N-catenin Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CTNNA2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CTNNA2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CTNNA2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CTNNA2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.