α-internexin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402920

Panoramica

INA codifica per l’α-internexina, una proteina neuronale dei filamenti intermedi che contribuisce all’architettura del citoscheletro e al calibro assonale assemblandosi in reti filamentose insieme ad altre subunità dei neurofilamenti. Supporta l’estensione dei neuriti, la stabilità dell’assone e il trasporto intracellulare organizzando il sistema dei filamenti intermedi nei neuroni in sviluppo e in quelli maturi. La disregolazione della dinamica dei filamenti intermedi, inclusa un’espressione alterata di INA o un’alterata organizzazione dei filamenti, viene spesso esaminata nel contesto della vulnerabilità neuronale, dell’assonopatia e dei processi neurodegenerativi associati all’aggregazione proteica. In quanto proteina strutturale arricchita nei neuroni, l’α-internexina è ampiamente utilizzata come marcatore e come punto di accesso meccanicistico per studi sulla differenziazione neuronale e sul rimodellamento del citoscheletro.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO α-internexin (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene INA in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del INA insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto INA a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina α-internexin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di INA per lo studio della segnalazione di α-internexin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni INA critici per la funzione di α-internexin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di INA per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal α-internexin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal α-internexin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus INA. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal α-internexin Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR α-internexin (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia INA per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio INA definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.