α-gal A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2): sc-419046-KO-2

Visão geral

Gla codifica a α-galactosidase A (α-gal A) murina, uma exoglicosidase lisossomal que remove resíduos terminais de α-galactosil de glicosfingolipídios e glicoconjugados relacionados. Essa atividade sustenta o catabolismo lisossomal e a homeostase de lipídios de membrana por meio da via de degradação de glicosfingolipídios, conectando a função do lisossomo a processos de controle de qualidade celular, como a autofagia e o tráfego endolisossomal. A disfunção da α-gal A é classicamente associada ao acúmulo de glicolipídios e a fenótipos de doenças de depósito lisossomal, tornando Gla um alvo relevante para estudar respostas ao estresse metabólico e disfunção de organelas. Em modelos murinos, a perturbação de Gla pode ser usada para investigar como alterações no turnover de lipídios influenciam inflamação, sinalização e a suscetibilidade específica de diferentes tipos celulares à sobrecarga lisossomal.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO α-gal A (m2) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Gla em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Gla, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Gla na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína α-gal A.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Gla para a investigação da sinalização de α-gal A, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Gla críticos para a função α-gal A
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Gla para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo α-gal A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo α-gal A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Gla. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo α-gal A Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR α-gal A (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Gla para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Gla definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.