αENaC CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422825

概要

Scnn1aは、上皮性ナトリウムチャネル（αENaC）のαサブユニットをコードしており、気道、腎臓、その他の上皮において、頂端膜を介したアミロライド感受性Na⁺吸収の律速成分です。αENaCはβおよびγサブユニットと複合体を形成して上皮間ナトリウム輸送を制御し、その結果、気道表面液（ASL）の恒常性や腎でのナトリウムバランスに影響を与えます。チャネル活性は、タンパク質分解による活性化やユビキチン依存的なターンオーバーによって調節され、特にNedd4-2を介したエンドサイトーシスや、ナトリウム取り扱いを調整するホルモン性シグナルが重要です。ENaC依存的なイオン輸送の調節異常は、マウスモデルにおける上皮性の体液バランス破綻、粘液の脱水、塩感受性の生理を研究するための機序的枠組みとして広く用いられています。

αENaC CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるScnn1a遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Scnn1a内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Scnn1aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、αENaCタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、αENaCシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Scnn1a欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• αENaCの機能に不可欠なScnn1aエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Scnn1aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• αENaC CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびαENaC CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Scnn1a遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  αENaC HDRプラスミド（m）および αENaC HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはScnn1aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のScnn1a標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。