α4a Tubulin Double Nickaseプラスミド (h): sc-400016-NIC

TUBA4Aはα4aチューブリンをコードしており、これはβチューブリンとヘテロ二量体を形成して微小管を構築する中核的なαチューブリンアイソフォームです。微小管は、細胞骨格の構築、細胞内輸送、ならびに有糸分裂紡錘体の動態に必須です。チューブリンアイソフォームの組成や翻訳後修飾によって駆動される微小管リモデリングは、モータータンパク質と微小管関連タンパク質（MAP）を協調させる経路を介して、細胞極性、小胞輸送、神経突起伸長に影響を与えます。チューブリン恒常性の破綻と微小管動態の異常は、神経変性様の表現型や軸索輸送障害に関与すると考えられており、遺伝学的研究ではTUBA4Aの変異が運動ニューロン疾患の感受性と関連することが示されています。そのため、TUBA4Aは細胞骨格ストレス応答、神経形態形成、ならびに微小管標的化合物に対する感受性のモデルにおいて、一般的に研究対象となっています。

α4a Tubulin ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における TUBA4A 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、TUBA4A内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、TUBA4Aの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、TUBA4Aが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。