α1b Tubulin Double Nickase Plasmid (h): sc-400021-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das α1b Tubulin Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- α1b Tubulin Double-Nickase-Plasmid (h) und α1b Tubulin Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf TUBA1B abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: α1b Tubulin: sc-134238
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
α1b Tubulin Double Nickase Plasmid (h) | sc-400021-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
α1b Tubulin Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400021-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TUBA1B kodiert α1b-Tubulin, eine zentrale strukturelle Komponente der Mikrotubuli, die die Organisation des Zytoskeletts, den intrazellulären Transport und die Dynamik des mitotischen Spindelapparats steuert. α/β-Tubulin-Heterodimere polymerisieren und regulieren Prozesse wie Chromosomensegregation, Zellpolarität und Vesikeltransport und sind zentral für Signal- und Regulationswege, die den Zellzyklusfortschritt sowie mikrotubuliabhängige Signalübertragung kontrollieren. Veränderte Tubulinexpression und Mikrotubuli-Dynamik sind häufig mit chromosomaler Instabilität und aberranter Proliferation verknüpft, wodurch TUBA1B ein geeigneter Ansatzpunkt für die Untersuchung von Mechanismen der Tumorbiologie und von Stressantworten auf Störungen des Zytoskeletts ist. Als breit exprimiertes Zytoskelett-Gen unterstützt TUBA1B zudem die Forschung zur neuronalen Differenzierung und zum axonalen Transport, bei denen die Integrität der Mikrotubuli essenziell ist.
α1b Tubulin Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des TUBA1B-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von TUBA1B abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die TUBA1B-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit TUBA1B-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.