ZSWIM7 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-407996-ACT

ZSWIM7 (zinc finger SWIM-type containing 7) è una proteina associata alla riparazione del DNA, implicata nella ricombinazione omologa e nel mantenimento della stabilità genomica. È stata collegata alla risoluzione degli intermedi di ricombinazione e supporta la riparazione accurata delle rotture a doppio filamento del DNA, contribuendo a una corretta segregazione dei cromosomi durante la divisione cellulare. Attraverso queste funzioni, ZSWIM7 si integra con le principali vie della risposta al danno al DNA e con la biologia più ampia dello stress replicativo. Alterazioni genetiche di ZSWIM7 sono state associate a una ridotta capacità di riparazione del DNA e a un aumento dell’instabilità genomica, rendendola rilevante per studi meccanicistici nella genetica del cancro e nei disordini ereditari del mantenimento del genoma.

ZSWIM7 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ZSWIM7 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ZSWIM7 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ZSWIM7 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ZSWIM7, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ZSWIM7. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ZSWIM7 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ZSWIM7 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ZSWIM7 nelle cellule tumorali con espressione di ZSWIM7 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.