ZFYVE28 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-412894

Panoramica

ZFYVE28 codifica una proteina contenente un dominio FYVE che riconosce il fosfatidilinositolo 3-fosfato sulle membrane endosomiali, collegando la segnalazione dei fosfoinositidi al traffico di membrana e allo smistamento delle proteine. Attraverso interazioni con componenti della macchina endocitica, ZFYVE28 è implicata nella regolazione dell’internalizzazione dei recettori, della maturazione degli endosomi e dell’organizzazione spaziale dei complessi di segnalazione. Questi processi si intersecano con le vie che controllano il turnover dei recettori per i fattori di crescita e la dinamica della segnalazione a valle, rendendo ZFYVE28 rilevante per studi sull’attenuazione del segnale e sul trasporto vescicolare. La deregolazione del traffico endosomiale e dello smistamento dipendente dai fosfoinositidi è associata ad alterazioni dell’omeostasi cellulare ed è stata chiamata in causa in molteplici contesti rilevanti per la malattia, inclusi fenotipi proliferativi e neurobiologici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ZFYVE28 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ZFYVE28 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ZFYVE28 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ZFYVE28 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ZFYVE28.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ZFYVE28 per lo studio della segnalazione di ZFYVE28, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ZFYVE28 critici per la funzione di ZFYVE28
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ZFYVE28 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ZFYVE28 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal ZFYVE28 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ZFYVE28. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ZFYVE28 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR ZFYVE28 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ZFYVE28 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ZFYVE28 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.