ZCCHC14 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-411686

Panoramica

ZCCHC14 codifica una proteina nucleare a dita di zinco di tipo CCHC, coinvolta in funzioni di legame all’RNA che influenzano la regolazione genica post-trascrizionale, inclusi la stabilità e il processamento dell’RNA. È stata associata a vie che governano il metabolismo dell’RNA e il controllo di programmi di espressione genica che modellano l’omeostasi cellulare. Evidenze emergenti collegano ZCCHC14 alle interazioni virus–ospite, in linea con i ruoli di fattori leganti lo zinco associati all’RNA nella regolazione dell’utilizzo dell’RNA virale e delle risposte del trascrittoma dell’ospite. La disregolazione delle proteine leganti l’RNA e delle reti di processamento dell’RNA è ampiamente rilevante per la segnalazione oncogena e le transizioni di stato cellulare, rendendo ZCCHC14 un nodo utile per studi meccanicistici in questi contesti.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ZCCHC14 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ZCCHC14 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ZCCHC14 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ZCCHC14 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ZCCHC14.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ZCCHC14 per lo studio della segnalazione di ZCCHC14, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ZCCHC14 critici per la funzione di ZCCHC14
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ZCCHC14 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ZCCHC14 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal ZCCHC14 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ZCCHC14. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ZCCHC14 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR ZCCHC14 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ZCCHC14 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ZCCHC14 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.