ZAR1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406501

Panoramica

ZAR1 (zygote arrest 1) codifica una proteina legante l’RNA, caratterizzata soprattutto per il suo ruolo nelle prime fasi dell’embriogenesi, dove supporta la transizione da ovocita a zigote e il controllo post-trascrizionale degli mRNA materni. Nelle cellule umane, ZAR1 è associato alla regolazione della stabilità e/o della traduzione degli mRNA e alla dinamica dei granuli citoplasmatici di ribonucleoproteine, processi che influenzano la progressione del ciclo cellulare e la competenza allo sviluppo. Un’espressione alterata o una deregolazione di fattori regolatori dell’RNA a effetto materno e associati alla linea germinale è stata collegata, in sistemi modello, a fenotipi di infertilità e a fallimenti dello sviluppo, rendendo ZAR1 rilevante per gli studi di biologia della riproduzione e delle vie dello sviluppo precoce. In quanto fattore arricchito a livello materno, ZAR1 rappresenta inoltre un nodo accessibile per indagare come le reti di regolazione dell’RNA si intersechino con le risposte allo stress e i programmi di differenziamento.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ZAR1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ZAR1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ZAR1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ZAR1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ZAR1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ZAR1 per lo studio della segnalazione di ZAR1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ZAR1 critici per la funzione di ZAR1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ZAR1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ZAR1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal ZAR1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ZAR1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ZAR1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR ZAR1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ZAR1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ZAR1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.