Plasmide CRISPR/Cas9 KO XTP3TPA (h): sc-407430

Présentation

DCTPP1 code pour XTP3TPA, une pyrophosphatase cytosolique du dCTP qui hydrolyse des désoxynucléosides triphosphates non canoniques afin de contribuer au maintien d’un pool de dNTP équilibré et au contrôle qualité des nucléotides. En limitant l’incorporation de nucléotides aberrants dans l’ADN, XTP3TPA soutient la stabilité du génome, la fidélité de la réplication et la coordination des réponses de réparation de l’ADN et au stress réplicatif. Une altération du métabolisme des nucléotides et un déséquilibre des pools de dNTP sont des caractéristiques fréquentes des états prolifératifs et de la biologie tumorale, ce qui fait de DCTPP1 un nœud pertinent pour étudier les liens entre assainissement des nucléotides, dommages oxydatifs et mutagenèse. L’étude fonctionnelle de DCTPP1 peut éclairer les mécanismes reliant la reprogrammation métabolique à la signalisation des dommages à l’ADN et au contrôle du cycle cellulaire dans les cellules humaines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO XTP3TPA (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène DCTPP1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du DCTPP1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert DCTPP1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine XTP3TPA.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en DCTPP1 pour l'étude de la signalisation de XTP3TPA, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de DCTPP1 essentiels à la fonction de XTP3TPA
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de DCTPP1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le XTP3TPA plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le XTP3TPA plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus DCTPP1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le XTP3TPA plasmide HDR (h) et le XTP3TPA (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie DCTPP1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles DCTPP1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.