XTP3TPA Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407430

Panoramica

DCTPP1 codifica XTP3TPA, una pirofosfatasi citosolica del dCTP che idrolizza deossinucleosidi trifosfato non canonici per contribuire a mantenere bilanciati i pool di dNTP e il controllo qualità dei nucleotidi. Limitando l’incorporazione di nucleotidi anomali nel DNA, XTP3TPA sostiene la stabilità del genoma, la fedeltà della replicazione e il coordinamento dei processi di riparazione del DNA e delle risposte allo stress replicativo. Un metabolismo dei nucleotidi alterato e uno squilibrio dei pool di dNTP sono caratteristiche comuni degli stati proliferativi e della biologia tumorale, rendendo DCTPP1 un nodo utile per studiare i legami tra “sanitizzazione” dei nucleotidi, danno ossidativo e mutagenesi. L’analisi funzionale di DCTPP1 può chiarire i meccanismi che collegano la riprogrammazione metabolica alla segnalazione del danno al DNA e al controllo del ciclo cellulare nelle cellule umane.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO XTP3TPA (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene DCTPP1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del DCTPP1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto DCTPP1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina XTP3TPA.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di DCTPP1 per lo studio della segnalazione di XTP3TPA, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni DCTPP1 critici per la funzione di XTP3TPA
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di DCTPP1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal XTP3TPA CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal XTP3TPA CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus DCTPP1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal XTP3TPA Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR XTP3TPA (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia DCTPP1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio DCTPP1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.