WDR59 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405648

Panoramica

WDR59 (WD repeat domain 59) è una proteina di impalcatura con ripetizioni WD40 che funge da componente centrale del complesso GATOR2, un importante regolatore a monte della segnalazione di mTORC1. Tramite GATOR2, WDR59 contribuisce alle vie di sensing degli amminoacidi che controllano l’attivazione lisosomiale di mTORC1, influenzando così la sintesi proteica, i programmi di crescita responsivi ai nutrienti e l’autofagia. L’alterazione della segnalazione dipendente da WDR59 può rimodellare il metabolismo cellulare e le risposte allo stress, processi frequentemente indagati nella biologia del cancro e in altri disturbi legati a una regolazione disfunzionale di mTOR. Di conseguenza, WDR59 viene studiata di routine per il suo ruolo nell’integrare la disponibilità di nutrienti con la crescita cellulare e l’omeostasi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO WDR59 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene WDR59 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del WDR59 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto WDR59 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina WDR59.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di WDR59 per lo studio della segnalazione di WDR59, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni WDR59 critici per la funzione di WDR59
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di WDR59 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal WDR59 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal WDR59 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus WDR59. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal WDR59 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR WDR59 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia WDR59 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio WDR59 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.