VRL-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423688

Panoramica

Trpv2 codifica per il canale murino VRL-1 (TRPV2), un canale cationico non selettivo della famiglia dei canali vanilloidi dei recettori a potenziale transitorio (TRP), che contribuisce all’ingresso di Ca²⁺ indotto da stimoli. VRL-1 partecipa a processi cellulari che includono la meccanosensazione e le risposte allo stress osmotico o termico, e può modulare la segnalazione a valle dipendente dal calcio, con effetti su eccitabilità di membrana, dinamica del citoscheletro e programmi trascrizionali. Nelle linee immunitarie e mieloidi, l’attività di TRPV2 è stata associata alla fagocitosi e alla segnalazione infiammatoria, mentre nei tessuti eccitabili viene studiata nel contesto della trasduzione sensoriale. Alterazioni della funzione o dell’espressione di TRPV2 sono state investigate in modelli di dolore neuropatico, disturbi infiammatori, cardiomiopatia e migrazione cellulare correlata al cancro, supportandone la rilevanza come bersaglio meccanicistico in molteplici vie biologiche.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO VRL-1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Trpv2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Trpv2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Trpv2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina VRL-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Trpv2 per lo studio della segnalazione di VRL-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Trpv2 critici per la funzione di VRL-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Trpv2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal VRL-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal VRL-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Trpv2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal VRL-1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR VRL-1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Trpv2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Trpv2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.