VPS13A Plasmide Double Nickase (h): sc-407168-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- VPS13A Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il VPS13A Double Nickase Plasmid (h) e il VPS13A Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira VPS13A. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
VPS13A Plasmide Double Nickase (h) | sc-407168-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
VPS13A Plasmide Double Nickase (h2) | sc-407168-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
VPS13A codifica una grande proteina periferica di membrana che si localizza nei siti di contatto tra organelli e supporta il trasporto lipidico e l’omeostasi delle membrane, con ruoli consolidati nel traffico endosomiale, nell’autofagia e nella funzione mitocondriale. Nei neuroni e in altre cellule metabolicamente attive, VPS13A contribuisce a mantenere la morfologia degli organelli e la loro distribuzione intracellulare coordinando lo scambio di lipidi e gli eventi di rimodellamento di membrana. L’alterazione di VPS13A compromette le risposte allo stress cellulare e la dinamica delle vescicole, rendendola un nodo chiave per lo studio della biologia dei siti di contatto di membrana e delle vie di controllo qualità degli organelli. Le varianti con perdita di funzione sono associate a fenotipi neurodegenerativi, offrendo un quadro rilevante per la malattia per studi meccanicistici in modelli di cellule umane.
VPS13A Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus VPS13A nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di VPS13A. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di VPS13A. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con VPS13A interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.