V-ATPase D2 Plasmide Double Nickase (h): sc-404907-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- V-ATPase D2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il V-ATPase D2 Double Nickase Plasmid (h) e il V-ATPase D2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ATP6V0D2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: V-ATPase D2 Antibody (7A4): sc-517031
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
V-ATPase D2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-404907-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
V-ATPase D2 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404907-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATP6V0D2 codifica la subunità D2 dell’ATPasi vacuolare H\+-dipendente (V-ATPasi), una pompa protonica multisubunità che acidifica endosomi, lisosomi e altri compartimenti intracellulari. L’acidificazione degli organelli guidata dalla V-ATPasi sostiene la proteolisi lisosomiale, il traffico endocitico, l’autofagia e la maturazione di recettori ed enzimi dipendente dal pH, integrandosi con vie che regolano il metabolismo e la segnalazione cellulare. Nelle cellule della linea mieloide, ATP6V0D2 è implicato nella funzione degli osteoclasti e nel riassorbimento osseo grazie al suo contributo al trasporto di protoni necessario alla degradazione della matrice. L’attività deregolata della V-ATPasi e l’alterata omeostasi del pH vescicolare sono oggetto di studio nel contesto dei disturbi del rimodellamento osseo e di processi infiammatori e neurodegenerativi più ampi collegati a una funzione lisosomiale compromessa.
V-ATPase D2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ATP6V0D2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ATP6V0D2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ATP6V0D2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ATP6V0D2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.