USP34 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-421760-LAC

Usp34 codifica l’enzima deubiquitinante USP34, una proteasi specifica per l’ubiquitina che rimodella le catene di poliubiquitina per controllare la stabilità delle proteine e l’intensità della segnalazione. USP34 è stata collegata alla regolazione di vie chiave, tra cui la segnalazione Wnt/β-catenina e altri processi ubiquitina-dipendenti che influenzano i programmi trascrizionali, la progressione del ciclo cellulare e le risposte allo stress cellulare. Attraverso i suoi effetti sulla proteostasi e sulla trasduzione del segnale, l’alterazione dell’attività di USP34 è studiata in relazione a fenotipi dello sviluppo e a disregolazioni, associate a patologie, delle vie di crescita e differenziamento. La USP34 del topo fornisce un sistema geneticamente manipolabile per indagare meccanismi conservati di deubiquitinazione nella fisiologia normale e in stati cellulari rilevanti per la malattia.

Le particelle di attivazione lentivirale USP34 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Usp34 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale USP34 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Usp34, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di USP34. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Usp34 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.