USF-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423628

Panoramica

Il fattore di trascrizione upstream 1 (USF-1), codificato dal gene murino *Usf1*, è un fattore di trascrizione di tipo basic helix–loop–helix con zipper a leucina che si lega ai motivi E-box per coordinare programmi di espressione genica che controllano metabolismo, crescita e risposte allo stress. USF-1 integra input di segnalazione per regolare reti trascrizionali coinvolte nell’omeostasi di lipidi e glucosio, nella funzione mitocondriale e nella progressione del ciclo cellulare, spesso attraverso interazioni con co-regolatori e complessi di modifica della cromatina. Nei sistemi murini, un’alterata attività di *Usf1* è stata associata a fenotipi metabolici disregolati e a segnali infiammatori, rilevanti per studi su tratti cardiometabolici e sulla regolazione genica epatica. In quanto regolatore trascrizionale ampiamente espresso, USF-1 è frequentemente studiato per il suo ruolo nel controllo della trascrizione, nella comunicazione enhancer–promotore e nel crosstalk tra vie di segnalazione alla base della suscettibilità a malattie complesse.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO USF-1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Usf1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Usf1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Usf1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina USF-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Usf1 per lo studio della segnalazione di USF-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Usf1 critici per la funzione di USF-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Usf1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal USF-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal USF-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Usf1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal USF-1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR USF-1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Usf1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Usf1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.