UNC5H3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403782-ACT

UNC5C codifica per il recettore umano della netrina UNC5H3, un recettore di dipendenza che media segnali guida chemiorepulsivi e contribuisce all’orientamento degli assoni, alla migrazione neuronale e all’organizzazione delle sinapsi. Attraverso il legame con netrina-1 e la segnalazione a valle, UNC5H3 influenza la dinamica del citoscheletro, l’adesione e la suscettibilità all’apoptosi, integrando input provenienti da vie che modellano l’architettura dei tessuti e la formazione dei circuiti neurali. Alterazioni dell’attività e dell’espressione di UNC5C sono state associate a fenotipi del neurosviluppo e a programmi di motilità cellulare deregolati, implicati in ambito oncologico e nel contesto delle malattie neurodegenerative. In quanto recettore di guida di superficie cellulare, UNC5H3 è inoltre rilevante per lo studio del traffico recettoriale, della segnalazione dipendente dal ligando e della segnalazione di sopravvivenza специфica del contesto.

UNC5H3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di UNC5C senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

UNC5H3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus UNC5C nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione UNC5C, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di UNC5H3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus UNC5C nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da UNC5H3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via UNC5H3 nelle cellule tumorali con espressione di UNC5C silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.