UCH-L1 Plasmide Double Nickase (h): sc-401088-NIC

UCHL1 codifica per l’idrolasi C-terminale dell’ubiquitina L1 (UCH-L1), un enzima deubiquitinante arricchito nei neuroni che mantiene l’omeostasi dell’ubiquitina e influenza il controllo di qualità delle proteine attraverso il sistema ubiquitina–proteasoma. Processando i coniugati dell’ubiquitina e regolando il turnover di specifici substrati, UCH-L1 incide sulla funzione sinaptica, sull’integrità assonale e sulle risposte cellulari allo stress, con effetti a valle sulle reti di proteostasi. La deregolazione dell’espressione o dell’attività di UCHL1 è stata collegata a fenotipi neurodegenerativi e a un’alterata resilienza neuronale, e UCH-L1 è ampiamente utilizzata come marcatore negli studi di differenziazione neurale e di danno neuronale. Queste caratteristiche rendono UCHL1 un bersaglio rilevante per analizzare i meccanismi che collegano deubiquitinazione, mantenimento del proteoma e vulnerabilità neuronale.

UCH-L1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus UCHL1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di UCHL1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di UCHL1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con UCHL1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.