Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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UBC13 Plasmide Double Nickase (m): sc-430050-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- UBC13 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il UBC13 Double Nickase Plasmid (m) e il UBC13 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Ube2n. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: UBC13 Antibody (F-10): sc-376470
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
UBC13 Plasmide Double Nickase (m) | sc-430050-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
UBC13 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-430050-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Ube2n codifica per l’enzima E2 coniugante l’ubiquitina UBC13, che catalizza la formazione di catene poliubiquitina legate tramite K63 in collaborazione con cofattori UEV come UBE2V1/UBE2V2. Questo segnale di ubiquitinazione non degradativa favorisce l’assemblaggio dei complessi della risposta al danno al DNA e regola la segnalazione dell’immunità innata tramite le proteine TRAF, contribuendo all’attivazione delle vie NF-κB e MAPK. Nei modelli murini, impalcature ubiquitiniche dipendenti da UBC13 influenzano la stabilità del genoma, il “tono” della segnalazione infiammatoria e le risposte allo stress cellulare nelle linee ematopoietiche e stromali. La deregolazione di questi processi è rilevante per studi su disfunzioni immunitarie, fenotipi infiammatori anomali e suscettibilità a patologie associate all’instabilità genomica.
UBC13 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Ube2n nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Ube2n. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Ube2n. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Ube2n interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.