TSHZ3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-410072-ACT

TSHZ3 (teashirt zinc finger homeobox 3) codifica un fattore di trascrizione nucleare caratterizzato da domini a dita di zinco C2H2 che regolano i programmi di espressione genica durante lo sviluppo e la specificazione dei tipi cellulari. Nei tessuti umani, TSHZ3 contribuisce al controllo trascrizionale dei processi di differenziamento e patterning, integrandosi con reti regolatorie geniche più ampie che plasmano l’identità di linea e l’organogenesi. La disregolazione dell’espressione o della funzione di TSHZ3 è stata collegata a fenotipi di neurosviluppo e a un’alterata formazione dei circuiti, rendendolo rilevante per studi sul controllo trascrizionale nelle linee neuronali e mesenchimali. In quanto regolatore che si lega al DNA, TSHZ3 viene comunemente studiato in vie che influenzano la morfogenesi, lo sviluppo sinaptico e le decisioni di destino cellulare.

TSHZ3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TSHZ3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

TSHZ3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TSHZ3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TSHZ3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TSHZ3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TSHZ3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TSHZ3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TSHZ3 nelle cellule tumorali con espressione di TSHZ3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.