TrxR2 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-402671-LAC

TXNRD2 codifica la tioredossina reduttasi mitocondriale TrxR2, una selenoproteina che mantiene la tioredossina-2 nel suo stato ridotto, supportando l’omeostasi redox mitocondriale. Fornendo equivalenti riducenti al sistema della tioredossina, TrxR2 contribuisce a controllare le specie reattive dell’ossigeno, l’equilibrio dei ponti disolfuro proteici e la segnalazione redox‑sensibile che influenza l’apoptosi e le risposte cellulari allo stress. L’attività di TXNRD2 si intreccia con le reti antiossidanti mitocondriali e con la fosforilazione ossidativa, collegandola a processi quali l’adattamento metabolico e il mantenimento dell’integrità mitocondriale. Alterazioni della funzione di TXNRD2/TrxR2 sono state associate a fenotipi legati allo stress ossidativo e vengono studiate in contesti che includono neurodegenerazione, disfunzioni cardiometaboliche e biologia del cancro, dove il controllo redox mitocondriale è una variabile chiave.

Le particelle di attivazione lentivirale TrxR2 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di TXNRD2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale TrxR2 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione TXNRD2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di TrxR2. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo TXNRD2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.