TRPC4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423515

Panoramica

Trpc4 codifica TRPC4, un canale cationico non selettivo della famiglia TRP canonica che media l’ingresso di Ca²⁺ attivato da recettore e quello dipendente dallo svuotamento dei depositi (store-operated), a valle della segnalazione GPCR e PLC. L’afflusso di Ca²⁺ dipendente da TRPC4 contribuisce alla depolarizzazione di membrana e a programmi trascrizionali calcio-dipendenti, influenzando processi quali la regolazione della barriera endoteliale, la contrattilità della muscolatura liscia e l’eccitabilità neuronale. Nei sistemi murini, l’attività di TRPC4 viene comunemente studiata in vie che controllano il tono e la permeabilità vascolare, la motilità del tratto gastrointestinale e delle vie urinarie e la segnalazione sinaptica. Una disregolazione dell’omeostasi del calcio legata a TRPC4 è stata associata a fenotipi rilevanti per la ricerca cardiovascolare, infiammatoria e neurocomportamentale, supportandone l’uso come nodo meccanicistico negli studi di segnalazione e fisiologia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TRPC4 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Trpc4 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Trpc4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Trpc4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TRPC4.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Trpc4 per lo studio della segnalazione di TRPC4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Trpc4 critici per la funzione di TRPC4
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Trpc4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TRPC4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal TRPC4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Trpc4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TRPC4 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR TRPC4 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Trpc4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Trpc4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.