Troponin C fast skeletal Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423432

Panoramica

Tnnc2 codifica la troponina C del muscolo scheletrico a contrazione rapida, una subunità regolatoria legante Ca2+ del complesso della troponina che controlla l’attivazione dei filamenti sottili e il ciclo dei ponti trasversali nel muscolo scheletrico a fibre rapide. Rilevando i transitori citosolici di Ca2+, TNNC2 coordina lo spostamento della tropomiosina sull’actina per modulare l’attività ATPasica dell’actomiosina e la forza contrattile durante l’accoppiamento eccitazione–contrazione. Questa proteina si integra con le vie del controllo del calcio e dell’organizzazione del sarcomero, collegando le dinamiche della segnalazione intracellulare all’output meccanico nelle miofibre. Alterazioni della funzione del complesso della troponina e della sensibilità al Ca2+ sono rilevanti per studi sulla performance del muscolo scheletrico, sulla fisiologia dei tipi di miofibra e sui meccanismi che contribuiscono a fenotipi di debolezza muscolare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Troponin C fast skeletal (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Tnnc2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Tnnc2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Tnnc2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Troponin C fast skeletal.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Tnnc2 per lo studio della segnalazione di Troponin C fast skeletal, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Tnnc2 critici per la funzione di Troponin C fast skeletal
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Tnnc2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Troponin C fast skeletal CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Troponin C fast skeletal CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Tnnc2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Troponin C fast skeletal Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Troponin C fast skeletal (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Tnnc2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Tnnc2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.