TRIP13 Plasmide Double Nickase (h): sc-404006-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- TRIP13 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il TRIP13 Double Nickase Plasmid (h) e il TRIP13 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira TRIP13. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: TRIP13 Antibody (A-7): sc-514285
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
TRIP13 Plasmide Double Nickase (h) | sc-404006-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TRIP13 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404006-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TRIP13 (thyroid hormone receptor interactor 13) codifica un’ATPasi AAA+ che rimodella le proteine contenenti un dominio HORMA per regolare lo spegnimento del checkpoint di assemblaggio del fuso e garantire una corretta segregazione dei cromosomi durante la mitosi. Controllando la stabilità degli attacchi cinetocoro–microtubulo e la segnalazione del checkpoint, TRIP13 sostiene l’integrità del genoma e la corretta progressione del ciclo cellulare. Un’attività deregolata di TRIP13 è stata associata a instabilità cromosomica e a una capacità proliferativa alterata, rendendolo un fattore rilevante negli studi su aneuploidia, risposte al danno al DNA e biologia dei tumori. L’analisi funzionale di TRIP13 è quindi informativa per comprendere le vie che collegano la sorveglianza mitotica alla stabilità genomica e alle decisioni sul destino cellulare.
TRIP13 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TRIP13 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TRIP13. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TRIP13. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TRIP13 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.