TRIP12 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420729

Panoramica

Trip12 codifica TRIP12, una ligasi E3 dell’ubiquitina di tipo HECT che catalizza il trasferimento di ubiquitina per regolare il turnover proteico e l’ampiezza delle vie di segnalazione. Nelle cellule di topo, TRIP12 contribuisce alla proteostasi dipendente dall’ubiquitina e influenza processi quali la risposta al danno al DNA, la regolazione della trascrizione e il controllo del ciclo cellulare, modulando la stabilità di fattori regolatori chiave. Come componente del sistema ubiquitina–proteasoma, l’ubiquitinazione mediata da TRIP12 può incidere sull’adattamento allo stress e sul mantenimento dell’integrità genomica. Un’alterata attività delle ligasi dell’ubiquitina è spesso associata a crescita disregolata e a fenotipi di neuro-sviluppo, rendendo Trip12 un bersaglio rilevante per studi meccanicistici dell’omeostasi cellulare e di vie associate a malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TRIP12 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Trip12 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Trip12 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Trip12 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TRIP12.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Trip12 per lo studio della segnalazione di TRIP12, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Trip12 critici per la funzione di TRIP12
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Trip12 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TRIP12 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal TRIP12 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Trip12. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TRIP12 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR TRIP12 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Trip12 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Trip12 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.