TRH-R1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m2): sc-423506-KO-2

Panoramica

Trhr codifica per il recettore 1 dell’ormone di rilascio della tireotropina (TRH-R1), un GPCR di classe A che lega il TRH ipotalamico per regolare la segnalazione dell’asse ipofisi-tiroide e il controllo neuroendocrino del metabolismo. Dopo il legame del ligando, TRH-R1 si accoppia principalmente a Gq/11 per attivare la fosfolipasi C, promuovendo la produzione di IP3/DAG, la mobilizzazione del Ca2+ intracellulare e programmi trascrizionali dipendenti dalla protein chinasi C. Nel topo, la segnalazione di TRH-R1 interagisce anche con le vie MAPK/ERK e influenza l’eccitabilità e la secrezione ormonale nei tessuti responsivi al TRH. La disregolazione della segnalazione TRH–TRH-R1 è stata associata ad alterazioni della dinamica dell’ormone tireostimolante (TSH) e a fenotipi endocrini e metabolici più ampi, a supporto del suo impiego in studi meccanicistici dell’omeostasi neuroendocrina.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TRH-R1 (m2) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Trhr in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Trhr insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Trhr a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TRH-R1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Trhr per lo studio della segnalazione di TRH-R1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Trhr critici per la funzione di TRH-R1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Trhr per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TRH-R1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal TRH-R1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Trhr. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TRH-R1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR TRH-R1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Trhr per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Trhr definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.