TRF1 Plasmide Double Nickase (m): sc-423339-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- TRF1 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il TRF1 Double Nickase Plasmid (m) e il TRF1 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Terf1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
TRF1 Plasmide Double Nickase (m) | sc-423339-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TRF1 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-423339-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Mouse Terf1 codifica TRF1, un componente centrale del complesso shelterin che si lega alle ripetizioni telomeriche a doppio filamento per regolare la lunghezza e l’architettura dei telomeri. TRF1 modula la dinamica della replicazione telomerica, sopprime un’attivazione aberrante dei segnali di danno al DNA alle estremità dei cromosomi e coordina, insieme a fattori di replicazione e riparazione, il mantenimento della stabilità del genoma. Attraverso i suoi ruoli nel “capping” telomerico e nella replicazione, TRF1 influenza vie collegate al controllo del ciclo cellulare, alla senescenza e all’instabilità cromosomica. Una funzione deregolata di TRF1 o un’alterata manutenzione dei telomeri è ampiamente associata, nei modelli di ricerca, al declino legato all’età e a fenotipi di instabilità genomica rilevanti per il cancro.
TRF1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Terf1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Terf1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Terf1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Terf1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.