TRAF4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423495

Panoramica

Il fattore associato al recettore del fattore di necrosi tumorale 4 (TRAF4), codificato dal gene murino *Traf4*, è una proteina adattatrice e una ligasi E3 dell’ubiquitina che collega la segnalazione prossimale al recettore alle reti di chinasi e di regolazione trascrizionale a valle. TRAF4 partecipa alla regolazione della segnalazione NF-κB e MAPK ed è stato collegato alla dinamica del citoscheletro, alla polarità cellulare e a processi legati alla barriera epiteliale tramite interazioni dipendenti dal contesto con complessi di membrana e giunzionali. Nei compartimenti immunitario ed epiteliale, l’attività di *Traf4* può influenzare l’ampiezza della segnalazione infiammatoria e le risposte cellulari allo stress. Le vie associate a TRAF4, quando deregolate, sono state studiate in relazione alla biologia tumorale, al rimodellamento tissutale e ai meccanismi delle malattie infiammatorie, rendendo *Traf4* un bersaglio utile per la dissezione delle vie di segnalazione in modelli murini e sistemi cellulari.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TRAF4 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Traf4 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Traf4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Traf4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TRAF4.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Traf4 per lo studio della segnalazione di TRAF4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Traf4 critici per la funzione di TRAF4
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Traf4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TRAF4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal TRAF4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Traf4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TRAF4 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR TRAF4 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Traf4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Traf4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.