Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
TNF-R2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423443
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- TNF-R2 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico TNF-R2, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: TNF-R2 Antibody (D-2): sc-8041
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
TNF-R2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-423443 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Tnfrsf1b codifica TNF-R2 (TNFRSF1B), un recettore del TNF espresso prevalentemente su popolazioni cellulari immunitarie, endoteliali e su alcune cellule stromali, che risponde preferenzialmente al TNF legato alla membrana. La segnalazione di TNF-R2 coinvolge proteine adattatrici per regolare l’attività delle vie NF-κB e MAPK, plasmando programmi di sopravvivenza cellulare, risposte citochiniche e rimodellamento tissutale. Nella biologia dei linfociti, TNF-R2 è strettamente associato alla stabilità delle cellule T regolatorie e alla segnalazione indotta dall’attivazione che modula l’equilibrio infiammatorio. Un’attività deregolata dell’asse TNF-R2 è stata implicata in modelli di infiammazione cronica, autoimmunità e processi neuroinfiammatori, rendendolo un nodo utile per studi meccanicistici sulla specificità delle vie del TNF.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TNF-R2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Tnfrsf1b in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Tnfrsf1b insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Tnfrsf1b a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TNF-R2.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Tnfrsf1b per lo studio della segnalazione di TNF-R2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Tnfrsf1b critici per la funzione di TNF-R2
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Tnfrsf1b per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal TNF-R2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal TNF-R2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Tnfrsf1b. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal TNF-R2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR TNF-R2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Tnfrsf1b per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Tnfrsf1b definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.